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试剂怎么用——核酸染色试剂

Wako





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即使是为同一目的所用的试剂种类繁多,同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。

因此,经常有研究人员向yobo体育app官方下载苹果问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。

为了解决这样的问题,小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。




◆核酸染色试剂


核酸染色试剂是用于可视化凝胶中的核酸、分析电泳分离后核酸的试剂。溴化乙锭是一种广泛用于核酸染色的染色试剂。但是,溴化乙锭被指出具有致突变性,应谨慎使用。最近,研究人员也开发了安全性高的新型核酸染色试剂。FUJIFILM Wako可提供溴化乙锭,以及及安全性高的SAFELOOK™系列等核酸染色类产品。



◆核酸染色试剂原理


用作核酸染色试剂的化合物,具有通过与核酸结合增强荧光强度的特性。常用的溴化乙锭 (Ethidium Bromide/EtBr) 通过插入DNA双链(也可与单链核酸结合),可将荧光强度提高约20倍。因此能够特异性检测核酸。


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图1. EtBr结构图



核酸染色试剂常用的化合物除溴化乙锭之外、还有4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole/DAPI)、碘化丙啶(Propidium Iodide/PI)和吖啶橙(Acridine Orange/AO)等。



致突变性


由于核酸染色试剂具有与核酸结合的特性,因此可能会诱导突变。实际上,在进行Ames测试时就发现了溴化乙锭具有致突变性1),处理时需谨慎小心。

FUJIFILM Wako提供的SAFELOOK™系列产品,已在Ames测试中确认致突变性低,可放心使用。

 

1) Huang, Qing, and Wei-Ling Fu. "Comparative analysis of the DNA staining efficiencies of different fluorescent dyes in preparative agarose 

1) gel electrophoresis." Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM) 43.8 (2005): 841-842.



选择染色方法


琼脂糖电泳中的核酸染色有预染色、后染色和上样添加染色三种方法。每种方法的优缺点总结如下。


■ 核酸染色试剂的特点



染色方法

预染色

后染色

上样染色

方法

  预先添加染色试剂至琼脂糖凝胶

  电泳后将琼脂糖凝胶浸入到加入染色试剂

  的缓冲液中

  向进行电泳的样品添加染色试剂

优点

  ● 电泳后无需染色时间

  ● 电泳中可观察条带

  ● 即使存在DNA 浓度差,也不会扰乱

  ● 电泳图

  ● 可长时间电泳

  ● 含变性剂的凝胶也可进行染色

● (需更换缓冲液)

  ● 电泳后无需染色时间

  ● 电泳中可观察条带

缺点

  ● 染色试剂结合导致的DNA浓度差,即

  ● 使分子量相同也会使条带在泳道间移动

  ● 使用EtBr时,长时间电泳会导致染色

●   剂流出凝胶

  ● 电泳后需染色时间

  ● 电泳途中不可观察条带

  ● 需均匀加入染色试剂

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  SAFELOOK™绿色核酸染料/ SAFELOOK™红色核酸染

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  SAFELOOK™绿色上样染料 (6×)
  SAFELOOK™红色上样染料 (6×)




◆产品列表


低致突变性核酸染料SAFELOOK™


产品编号

产品名称

包装

194-18843

SAFELOOK™ Green Nucleic Acid Stain

SAFELOOK™ 绿色核酸染料

500 μL

197-18833

SAFELOOK™ Red Nucleic Acid Stain

SAFELOOK™ 红色核酸染料

500 μL

199-18153

SAFELOOK™ Load-Green (6×)

SAFELOOK™ 绿色上样染料 (6×)

1 mL

196-18163

SAFELOOK™ Load-Red (6×)

SAFELOOK™ 红色上样染料 (6×)

1 mL

194-18164

1 mL ×5



溴化乙锭


产品编号

产品名称

包装

315-90051

Ethidium Bromide Solution

溴化乙啶溶液(EB溶液)

10 mL



◆参考文献


大藤道衛 編, 電気泳動なるほどQ&A, 羊土社, 2007

田村隆明 編, ライフサイエンス 試薬活用ハンドブック, 羊土社, 2009


※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。

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